Nöron hasarına yol açan hastalıklarda nöroglial  spesifik ekzozomlarda miRNA temelli tanı paneli geliştirilmesi  

PROJE HEDEFLERİ

Eksozomlar, çapları 40-100 nm olan keseciklerdir ve kargo içeriklerinde mRNA, miRNA ve diğer kodlamayan RNA’ları ve protein, lipid gibi molekülleri taşıdıkları bilinmektedir. Eksozomlar hücrelerden hem normal hem de patolojik koşullarda salınırlar. Eksozomların içerdikleri farklı türde moleküller nedeniyle birçok hastalık için biyobelirteç olma potansiyeli taşımaktadırlar. MikroRNA’lar (miRNAlar), post-transkripsiyon ve translasyon düzeyinde düzenleme mekanizmasının aracıları olan moleküllerdir. Yapılan çalışmalarda şizofreni, depresyon, anksiyete gibi pek çok psikiyatrik hastalıkta miRNA profillerinde değişiklik saptanmıştır. Bu bakımdan nöronal hastalıklarda nöroglial spesifik eksozomların incelenmesi hastalık tanı ve patolojisi bakımından oldukça önemli olup nöroglial eksozomal miRNA içeriğinin potansiyel biyobelirteç olarak belirlenebilmesi hastalık tanısı ve tedavisinde kullanılabilmeleri adına önemlidir.Projede:

1. Nöropatolojik hastalık olan demans, bipolar bozukluk ve periventriküler lökomalazi (PVL) hastalarından elde edilecek nöroglial spesifik eksozomlardan   miRNA profilleri  saptanması,
2. miRNA’lar seçilerek SİMoA (Single molecular array) teknolojisi kullanılarak miRNA tanı kiti geliştirilmesi hedeflenmektedir.   SİMoA teknolojisi alışılagelmis ELISA kitlerinden çok daha hassas seviyelerde ölçüm sağlayan mikropartikül tabanlı bir teknolojidir. Ticari ELISA kitleri pg/ml seviyesinde bir hassaslık sağlarken SiMoA kitleri ile alınan ölçümler femtogram (fg/ml) seviyesinde hassasiyet gösterebilmektedir. Bu sayede kanda çok düşük konsantrasyonlarda bulunan biyobelirteçlerin ölçülebilmesine olanak sağlamaktadır.
3. Daha sonra geliştirdiğimiz kit ile alınan sonuçlar, miRNA seviyesi ölçümlerinde sıkça kullanılan ve gold standard olarak kabul edilen qPCR tekniği sonuçları ile karşılaştırılarak kitin validasyonu sağlanacaktır.